常見(jiàn)問(wèn)題

解決方案

新購(gòu)色譜柱如何活化

使用新色譜柱之前，必須用 100%甲醇 30-40 倍柱體積進(jìn)行沖洗活化。

如何過(guò)渡到流動(dòng)相

先用流動(dòng)相使用的有機(jī)溶劑沖洗 20-30 倍柱體積，將流動(dòng)相中的緩沖鹽換成水，沖洗 20-30 倍柱積，再用流動(dòng)相沖洗 30-40倍柱體積。

如何過(guò)渡到流動(dòng)相

先用流動(dòng)相使用的有機(jī)溶劑沖洗 20-30 倍柱體積，將流動(dòng)相中的緩沖鹽換成水，沖洗 20-30 倍柱積，再用流動(dòng)相沖洗 30-40倍柱體積。

使用完色譜柱如何沖洗保存

使用完色譜柱，先用乙腈：水=10:90 沖洗 60 倍柱體積，再用100%乙腈沖洗 40 倍柱體積，保存于乙腈中，將色譜柱兩頭的堵頭擰緊，放于盒中。若進(jìn)行長(zhǎng)期保存，定期將色譜柱拿出，用乙腈沖洗，保證色譜柱中的保存液不干涸。

三聚氰胺的主峰與雜質(zhì)峰分不開(kāi)

1 調(diào)整流動(dòng)相比例，加大緩沖液的比例。C18 柱調(diào)整流動(dòng)相至離子對(duì)試劑：乙腈=92：8，C8 柱調(diào)整流動(dòng)相至離子對(duì)試劑：乙腈=90：10（液相方法）。2 將柱溫設(shè)置于 40℃以上。

基線不平

1 平衡時(shí)間過(guò)短：延長(zhǎng)平衡時(shí)間。
2 色譜柱污染：沖洗色譜柱。
3 色譜柱沒(méi)有連接好，有漏液現(xiàn)象：檢查連接情況。
4 液相儀器檢測(cè)器污染：進(jìn)行儀器維護(hù)。
5 液相儀器檢測(cè)器氘燈能量過(guò)低：更換檢測(cè)器氘燈。

主峰出現(xiàn)裂分，峰型較寬

1 溶劑效應(yīng)：用國(guó)標(biāo)方法溶解，降低溶解溶劑強(qiáng)度。
2 色譜柱污染：沖洗色譜柱，若嚴(yán)重污染，更換色譜柱。
3 色譜柱填料塌陷：維修或更換色譜柱。
4 液相儀器柱外效應(yīng)過(guò)大：更換管路，減小柱外效應(yīng)。
5 樣品體積過(guò)大：用流動(dòng)相配樣，總的樣品體積小于*峰
的 15%。
6 將色譜柱柱溫過(guò)低：提高柱溫。

色譜柱蛋白污染，如何再生

沖洗色譜柱方法：（前步無(wú)法將色譜柱再生，進(jìn)行下一步）1%乙酸水溶液 →1%三*乙酸水溶液 → 0.1%三*乙酸：異丙醇=40:60 → NaCl，Na3PO4，Na2SO4 水溶液 0.5-1.0M (Na3PO4pH7.0) →DMSO：水=50:50/DMF：水=50:50。

壓力不穩(wěn)

1 泵內(nèi)有空氣：清除泵內(nèi)空氣，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理。
2 比例閥失效：更換比例閥。
3 泵密封墊損壞：更換密封墊。
4 溶劑中有氣泡：對(duì)溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法。
5 系統(tǒng)漏液：找出漏點(diǎn)，密封。
6 梯度洗脫：壓力波動(dòng)是正常的。
7 單向閥堵塞：超聲波清洗單向組件。
8 單向閥泄露：更換密封裝置。

保留時(shí)間不穩(wěn)定

1 柱溫變化：保持恒定柱溫。
2 等度與梯度間未能充分平衡：至少用 10 倍柱體積的流動(dòng)相
平衡柱。
3 緩沖液容量不夠：用>25mmol/L 的緩沖液。
4 柱污染：每天沖洗柱。

5 柱內(nèi)條件變化：穩(wěn)定進(jìn)樣條件，調(diào)節(jié)流動(dòng)相。
6 柱快達(dá)到壽命：采用保護(hù)柱。

保留時(shí)間縮短

1 流速增加：檢查泵，重新設(shè)定流速。
2 樣品超載：降低樣品進(jìn)樣量。
3 鍵合相流失，流動(dòng)相 pH 值超出適用范圍，色譜柱連接方向
錯(cuò)誤。
4 流動(dòng)相組成變化：防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀。
5 溫度增加。

保留時(shí)間延長(zhǎng)

1 流速下降：管路泄漏，更換泵密封圈，排除泵內(nèi)氣泡。
2 硅膠柱活性變化：可以用流動(dòng)相改性劑，如加三乙胺，或
采用其它堿鈍化色譜柱柱。
3 鍵合相流失：流動(dòng)相 pH 值超出適用范圍，色譜柱連接方向
錯(cuò)誤。
4 流動(dòng)相組成變化：防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀。
5 溫度降低。

鬼峰

1 進(jìn)樣閥殘余峰：用強(qiáng)溶劑清洗閥，改進(jìn)閥和樣品的清洗。
2 樣品中未知物：處理樣品。
3 柱未平衡：重新平衡柱，用流動(dòng)相作樣品溶劑（尤其是離
子對(duì)色譜）。
4 三*乙酸（TFA）氧化（肽譜）：每天新配，用抗氧化劑。
5 水污染（反相）：通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用 HPLC
級(jí)的水。

基線噪音

1 氣泡（尖銳峰）：流動(dòng)相脫氣，加柱后背壓。
2 污染（隨即噪聲）：清洗柱，凈化樣品，用 HPLC 級(jí)試劑。
3 檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲：更換氘燈。
4 電干擾（偶然噪聲）：采用穩(wěn)定電源，檢查干擾的來(lái)源（如
水浴等）。
5 檢測(cè)器中有氣泡：流動(dòng)相脫氣，加柱后背壓。

峰拖尾

1 柱超載：降低樣品量，增加柱直徑或采用較高容量的固定
相。
2 峰干擾：清潔樣品，調(diào)整流動(dòng)相。
3 硅羥基作用：加三乙胺，用堿屏蔽硅羥基活性，增加緩沖
液或鹽的濃度降低流動(dòng)相 pH 值，鈍化樣品。
4 篩板堵塞：超聲清洗或更換篩板，加在線過(guò)濾器過(guò)濾樣品。
5 柱塌陷或形成短路通道：更換色譜柱，采用較弱腐蝕性條
件。
6 死體積或柱外體積過(guò)大：盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管。
7 柱效下降：用較低腐蝕條件，更換柱或采用保護(hù)柱。

峰展寬

1 進(jìn)樣體積過(guò)大：用流動(dòng)相配樣，總的樣品體積小于*峰
的 15%。
2 在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展：進(jìn)樣前后排除氣泡以降低擴(kuò)散。
3 數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢：設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于 10 點(diǎn)。
4 檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大：設(shè)定時(shí)間常數(shù)為*峰半寬的 10%。5 流動(dòng)相粘度過(guò)高：增加柱溫，采用低粘度流動(dòng)相。
6 檢測(cè)池體積過(guò)大：用小體積池，卸下熱交換器。
7 保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)：將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至小，采用
細(xì)內(nèi)徑管路。
8 柱外體積過(guò)大：將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至小，采用
細(xì)內(nèi)徑管路。9 樣品過(guò)載：降低進(jìn)樣濃度，或減少進(jìn)樣體積。